توتال کانت (یا شمارش کل کلنیها) برای اندازهگیری تعداد کلیه میکروارگانیسمها، اعم از زنده و غیرزنده، در نمونهها به کار میرود. آزمون توتال کانت بهویژه برای ارزیابی تعداد باکتریها، مخمرها و کپکها در محیطهای مختلف مانند مواد غذایی، آب یا نمونههای بیولوژیکی کاربرد دارد.
در این روش، نمونه مورد نظر بر روی محیط کشت مناسب قرار داده شده و سپس تعداد کل میکروارگانیسمها که بهصورت کلنیهای قابل شناسایی رشد کردهاند، شمارش میشود. توتال کانت میتواند شاخصی مهم برای بررسی کیفیت و ایمنی محصولات و همچنین ارزیابی وضعیت میکروبی نمونهها باشد.
جهت دریافت خدمات و مشاوره رایگان با نیکوفامد تماس بگیرید.
روش محاسبه توتال کانت
روش محاسبه توتال کانت شامل مراحل زیر است:
تهیه نمونه و رقیقسازی (Serial Dilution)
ابتدا، نمونه اولیه (مانند آب، مواد غذایی یا نمونههای محیطی) تهیه میشود. سپس، نمونه با استفاده از محلولهای رقیقکننده استریل (مانند سرم فیزیولوژی یا بافر فسفات) بهصورت متوالی رقیق میشود تا تراکم میکروبی کاهش یابد. این کار تضمین میکند که تعداد کلنیهای تشکیلشده در پلیتها در محدوده قابل شمارش (30 تا 300 کلنی) قرار گیرد.
انتقال به محیط کشت
حجم مشخصی (معمولاً 0.1 میلیلیتر) از هر رقت تهیهشده به سطح یک محیط کشت جامد مناسب (مانند آگار مغذی یا آگار PCA) منتقل شده و با استفاده از تکنیک اسپریدینگ (Spreading) روی سطح آن پخش میشود.
انکوباسیون
پلیتهای تلقیحشده در دمای مناسب (مانند 35-37 درجه سانتیگراد برای باکتریهای مزوفیل) و به مدت مشخص (معمولاً 24 تا 48 ساعت) در دستگاه انکوباتور قرار داده میشوند. شرایط انکوباسیون باید متناسب با نوع میکروارگانیسم مورد بررسی تنظیم شود.
شمارش کلنیها
پس از انکوباسیون، کلنیهای رشد کرده روی سطح پلیت شمارش میشوند. تعداد کلنیها باید در رقتهایی که کلنیها بین 30 تا 300 عدد هستند، ثبت شود؛ زیرا شمارش دقیق در این محدوده اطمینان بیشتری فراهم میکند.
گزارشدهی
نتایج بهصورت تعداد کل واحدهای تشکیلدهنده کلنی (CFU) در هر میلیلیتر یا گرم نمونه گزارش میشود و معمولاً برای ارزیابی کیفیت میکروبی یا سطح آلودگی نمونه مورد استفاده قرار میگیرد.
این روش، استانداردی برای کنترل کیفیت در صنایع مختلف ازجمله مواد غذایی، آب و محصولات دارویی است.
برای آشنایی با آزمون بایوبردن کلیک کنید.
CFU چیست؟
CFU یا واحدهای تشکیلدهنده کلنی (Colony Forming Unit) معیاری است که برای تخمین تعداد سلولهای زنده و قابلبقا در یک نمونه استفاده میشود. این مفهوم بر اساس توانایی یک سلول منفرد یا یک گروه از سلولها در تشکیل یک کلنی قابل مشاهده بر روی محیط کشت جامد تعریف میشود. برای تعیین CFU، ابتدا نمونه با روش سریال رقت رقیق میشود، سپس حجم مشخصی از رقت مناسب روی محیط کشت تلقیح شده و در شرایط انکوباسیون مناسب قرار میگیرد. پس از انکوباسیون، تعداد کلنیهای تشکیلشده شمارش شده و محاسبه میشود. CFU بهعنوان یک شاخص دقیق برای بررسی کیفیت میکروبی و بار زنده میکروارگانیسمها در صنایع غذایی، پزشکی و زیستمحیطی مورد استفاده قرار میگیرد.
فرمول محاسبه CFU
فرمول محاسبه تعداد واحدهای تشکیلدهنده کلنی (CFU) به صورت زیر است:
CFU=تعداد کلنیهای شمارششده×ضریب حجم×ضریب رقت
- تعداد کلنیهای شمارششده: کلنیهایی که روی پلیت قابلشمارش بودهاند (معمولاً بین 30 تا 300 کلنی).
- ضریب حجم: معمولاً 10 است، زیرا حجم استاندارد نمونه تلقیحشده معمولاً 0.1 میلیلیتر است.
- ضریب رقت: بر اساس تعداد رقت انجامشده (مثلاً 10510^5 یا 10610^6).
CFU=50×10×106=5×108CFU/ml
آزمایشگاه همکار نیکوفارمد به عنوان یکی از مراکز معتبر در زمینه تحلیلهای میکروبی، آزمون توتال کانت را با دقت و رعایت استانداردهای بینالمللی انجام میدهد. این آزمایش به منظور تعیین تعداد کل میکروارگانیسمها، اعم از باکتریها، مخمرها و کپکها، در نمونههای مختلف مانند محصولات دارویی، مواد غذایی و آب انجام میشود. با استفاده از روشهای پیشرفته رقیقسازی، کشت بر روی محیطهای مناسب و شمارش دقیق کلنیها، این آزمایشگاه قادر است نتایج دقیقی از بار میکروبی نمونهها ارائه دهد که برای ارزیابی کیفیت و ایمنی محصولات ضروری است. نتایج بهدستآمده از آزمون توتال کانت در این آزمایشگاه میتواند در تصمیمگیریهای مربوط به کنترل کیفیت و استانداردسازی محصولات بهکار رود.